细胞类型与特性

原代细胞：直接从组织中分离的细胞，通常指第1-10代细胞，具有接近体内状态的特性。
细胞系：原代细胞首次传代成功后形成的细胞群，可连续传代。
细胞株：从原代培养或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞，通常为第10-137代。
根据生长方式分为：

 贴壁细胞：需附着在培养瓶表面生长，如成纤维细胞、上皮细胞。
悬浮细胞：在培养基中自由悬浮生长，如血液细胞。
半贴壁半悬浮细胞：兼具贴壁和悬浮生长特性。
商品介绍
产品名称：SNU-475人肝癌细胞
英文名称：SNU-475
种属来源；人
组织来源；肝
性别年龄；43岁，亚洲男性
生长特性；贴壁生长
细胞形态；上皮细胞样
细胞规格；1 X 106cells/T25或1 mL冻存管
培养条件；RPMI-1640 Medium +10% fetal bovine serum37 ℃, 5% CO2
冻存条件；90% FBS + 10% DMSO
传代方法；1:3传代, 2-3天传1代
具体特点如下：

环境与营养：需无菌环境、精确的温度（36-37℃）和pH（7.2-7.4），动物细胞常需血清，植物细胞需激素。
生长方式：贴壁细胞需表面附着，悬浮细胞自由漂浮，半贴壁半悬浮兼具两者特性。
传代与密度：贴壁细胞需胰酶消化传代，悬浮细胞直接分瓶；密度达80%-177%时需传代，避免营养枯竭与代谢抑制。
敏感性：对剪切应力、污染、温度变化敏感，需定期更换培养液清除代谢物。
应用与局限：便于活细胞观察与实验控制，但体外环境与体内存在差异，长期传代可能导致遗传不稳定与去分化。
细胞培养操作流程主要包含以下几个关键步骤：

1. 快速融化： 从液氮中取出冻存管，立即放入37℃水浴中，轻轻晃动，使其在1分钟内快速融化。
2. 转移与稀释： 将融化的细胞悬液转移至含预热完全培养基的离心管中，轻轻混匀，以稀释保护剂DMSO。
3. 离心与重悬： 离心后弃去上清液，用新鲜培养基重悬细胞沉淀。
4. 培养： 将细胞接种到培养瓶中，放入37℃、5% CO₂的培养箱中静置培养。

• 贴壁细胞：
  1. 消化： 吸弃旧培养基，用PBS缓冲液润洗后，加入胰酶（Trypsin）溶液，在37℃下消化1-5分钟，显微镜下观察到大部分细胞变圆脱落时，立即加入含血清的培养基终止消化。
  2. 吹打与计数： 轻轻吹打使细胞完全脱落，制成单细胞悬液，进行计数。
  3. 接种： 按一定比例（如1:3, 1:5）将细胞悬液接种到新的培养瓶中，补充新鲜培养基后放回培养箱。
• 悬浮细胞：
  1. 直接传代： 当细胞密度高、培养基变黄时，可直接将部分细胞悬液转移至新瓶，补充新鲜培养基即可。
  2. 离心传代： 若需去除细胞碎片，可将细胞悬液离心，弃去部分上清或全部上清后，用新鲜培养基重悬细胞，再按比例接种到新瓶中。

1. 贴壁细胞： 直接吸弃旧培养基，加入预热的新鲜完全培养基即可。
2. 悬浮细胞： 将细胞悬液离心，弃去旧培养基（上清液），用新鲜培养基重悬细胞沉淀。
   换液频率一般为2-3天一次，具体根据细胞密度和培养基颜色调整。

1. 收集细胞： 收集处于对数生长期的细胞，离心。
2. 配制冻存液： 用冻存液（常用含10% DMSO和20%胎牛血清的完全培养基）重悬细胞。
3. 程序降温： 将细胞分装至冻存管，放入程序降温盒中，于-80℃冰箱过夜。
4. 长期保存： 次日将冻存管转移至液氮罐中长期保存。