产品用途
用于转基因玉米中NOS终止子(NOS)和筛选标记基因(SS)的定性或定量PCR检测,适用于科研实验。
产品组成
主反应混合液(2×PCR MasterMix):含Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等,0.5 mL/管。
引物-探针混合液:特异性靶向NOS/SS基因序列,150 μL/管(预混FAM/HEX荧光标记探针)。
阳性对照(1×10^7拷贝/μL):50 μL/管,为含目标序列的非传染性DNA片段。
阴性对照:超纯水,1 mL/管。
模板稀释液:1 mL/管,用于标准曲线制备。
技术参数
检测限:≤10拷贝/反应(灵敏度)。
线性范围:10^1~10^6拷贝/μL(定量检测时)。
反应体系:20 μL/反应(推荐),可适配主流荧光定量PCR仪。
包装规格:50次/盒。
操作步骤
样本前处理
使用商用DNA提取试剂盒从玉米样品中提取基因组DNA,A260/A280建议1.8~2.0。
标准曲线制备(定量检测需选做)
将阳性对照10倍梯度稀释(10^6~10^1拷贝/μL),每个浓度设3复孔。
PCR反应配制
| 组分 | 体积(μL) |
| 2×MasterMix | 10 |
| 引物-探针液 | 1 |
| 模板DNA | 2 |
| 超纯水 | 7 |
扩增程序
| 步骤 | 温度/时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃, 3 min | 1 |
| 变性 | 95℃, 15 sec | 40 |
| 退火/延伸 | 60℃, 30 sec | |
质量控制
阳性对照:Ct值≤30且S型扩增曲线。
阴性对照:无扩增信号(Ct值≥40或无峰)。
样本判定:Ct值≤35且曲线正常视为阳性。
注意事项
实验分区操作,避免气溶胶污染。
试剂运输保存:-20℃避光,有效期12个月,避免反复冻融(≤3次)。
本产品仅限科研用途,不可用于临床诊断。
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