检测原理
采用 TaqMan® 实时荧光PCR技术:
特异性引物与探针靶向 GA21品系外源基因插入序列(如:mEPSPS 基因的特异片段)
同步检测 玉米内源基因(如:zein蛋白基因) 作为DNA提取与扩增质控
通过荧光信号增长曲线(FAM/VIC通道)判定样本是否含GA21成分
适用范围
样本类型:玉米种子、叶片、加工品(面粉、饲料等)DNA提取物
检测对象:转基因玉米GA21品系特异性序列
灵敏度:≤ 0.1% 转基因含量(推荐DNA浓度≥10ng/μL)
试剂盒组分
| 组分 | 体积 | 保存条件 |
| PCR预混液(含dNTPs, Taq酶) | 1.2mL×2管 | -20℃ |
| GA21品系特异性引物/探针混合液 | 100μL | -20℃避光 |
| 玉米内参基因引物/探针混合液 | 100μL | -20℃避光 |
| 阴性对照(ddH₂O) | 1mL | -20℃ |
| GA21阳性对照(质粒DNA) | 50μL | -20℃ |
| 说明书 | 1份 | 常温 |
操作流程
1 DNA提取
使用合规植物基因组DNA提取试剂盒(如CTAB法/柱提法)
2 PCR反应体系配制
| 组分 | 体积/单反应 |
| PCR预混液 | 10μL |
| GA21引物探针混合液 | 1μL |
| 内参基因引物探针混合液 | 1μL |
| DNA模板 | 2μL(50-100ng)|
| Nuclease-free水 | 补足至20μL |
3 PCR程序设置
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min | 1 |
| 变性 | 95℃ | 15 sec | 40 |
| 退火/延伸 | 60℃ | 45 sec(采集荧光)| |
结果判读
| 通道 | 阴性对照 | 阳性对照 | 样品 | 结论 |
| FAM (GA21) | ≤阈值 | 指数增长 | 扩增曲线 | 含GA21 |
| VIC (内参) | - | 扩增 | 有效扩增 | DNA质量合格 |
| 判定标准 | | | |
| 阳性:FAM通道Ct值≤38.0且呈S型曲线
阴性:FAM无扩增(Ct值=Undetermined),且VIC通道扩增正常
无效:VIC通道无扩增 → 重新提取DNA或检查反应体系
注意事项
避免污染:试剂分装区、DNA提取区、PCR扩增区分区操作
保存稳定性:未开封试剂盒-20℃保存12个月;解冻后预混液建议4℃保存≤1周
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