本试剂盒仅供研究使用。
96T
使用目的：
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中细胞角蛋白18-M65(CK18-M65)表达。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人细胞角蛋白18-M65(CK18-M65)表达。用纯化的人细胞角蛋白18-M65(CK18-M65)抗体包被微孔板，制成固相抗体，可与样品中细胞角蛋白18-M65(CK18-M65)相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的细胞角蛋白18-M65(CK18-M65)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中人细胞角蛋白18-M65(CK18-M65)的存在与否。
试剂盒组成
| 1 |
30倍浓缩洗涤液 |
20ml×1瓶 |
7 |
终止液 |
6ml×1瓶 |
| 2 |
酶标试剂 |
6ml×1瓶 |
8 |
阳性对照 |
0.5ml×1瓶 |
| 3 |
酶标包被板 |
12孔×8条 |
9 |
阴性对照 |
0.5ml×1瓶 |
| 4 |
样品稀释液 |
6ml×1瓶 |
10 |
说明书 |
1份 |
| 5 |
显色剂A液 |
6ml×1瓶 |
11 |
封板膜 |
2张 |
| 6 |
显色剂B液 |
6ml×1/瓶 |
12 |
密封袋 |
1个 |
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
- 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）
- 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，
- 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
- 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
- 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
- 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
- 温育：操作同3。
- 洗涤：操作同5。
- 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
- 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
- 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
计算和结果判定：
试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.20
临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
阴性判定：样品OD值< 临界值（CUT OFF）者为细胞角蛋白18-M65(CK18-M65)阴性
阳性判定：样品OD值≥ 临界值（CUT OFF）者为细胞角蛋白18-M65(CK18-M65)阳性。
注意事项
1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。
2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
5．底物请避光保存。
6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm
7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸，使用时必须注意安全。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月
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